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黛龙素在水产养殖中与其它常用消毒剂的比较
Ps-2,E3,RZ-1和751四种致病菌对黛龙素等三种消毒剂的 敏感性研究
李怡 杨先乐 张良 胡鲲
上海水产大学农业部渔业动植物病原库 200090
摘 要 用黛龙素对养殖鱼类暴发性疾病的致病菌嗜水气单胞菌(AH-2),鳗鲡的细菌性疾病的致病菌鳗弧菌(E3),对虾细菌性疾病的溶藻弧菌(RZ-01)和鳗爱德华氏病的迟钝爱德华氏菌(751)进行体外抗菌实验,并用二溴海因,碘伏作为对照,测定其最小抑菌浓度(MIC)。结果表明:黛龙素对这四种菌的MIC分别为2.5μg/ml,31.2/ml和1.25μg/ml,0.039μg/ml,碘伏对这四种菌的MIC均大于10μg/ml,二溴海因对这四种菌的MIC分别为10μg/ml,62.5μg/ml,>10μg/ml,10μg/ml。
关键词 黛龙素,嗜水气单胞菌,迟钝爱德华氏菌,溶藻弧菌,鳗弧菌,最小抑菌浓度

        黛龙素的化学名称是聚六亚甲基胍(PHMG),是一种环保型多用途新型聚合物,强力,杀菌谱广,长效,可降解,对环境没有污染。且它具有防霉、防腐等特点,但至今没有用于水产养殖消毒剂的报道。黛龙素在水产养殖中的作用是一个关键问题。鉴此,本文对几种常见致病菌对黛龙素的敏感性进行了研究,以期为黛龙素在水产养殖中的应用提供依据以及它作为消毒剂使用中的方法与剂量对黛龙素的研究与开发非常重要。
        本文用黛龙素对养殖鱼类暴发性疾病的致病菌嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophlia)(AH-2),鳗鲡的细菌性疾病的致病菌鳗弧菌(Vibrioanguilla)(E3),对虾细菌性疾病的溶藻弧菌(Vibrioalginolaticus)(RZ-01)和鳗爱德华氏病的迟钝爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)(751)进行体外抗菌实验,并用二溴海因,碘伏作为对照,测定其最小抑菌浓度(MIC)。

1.材料与方法
1.1实验材料
1.1.1实验菌株:AH-2、E3、RZ-01和751均为中华人民共和国农业部动植物病原库保存的菌种。将AH-2、E3、RZ-01和751分别接种于普通营养琼脂斜面培养基复苏,再将斜面菌种转接于10mL的营养肉汤液体培养基中,在28℃培养18~24h备用。
1.1.2黛龙素及其母液的配制:黛龙素由上海黛龙生物工程科技有限公司提供,含黛龙素25%。将其配制为含黛龙素5000μg/ml、100μg/ml的母液。
1.1.3碘伏母液的配制:碘伏及其母液的配制:碘伏由东海水产研究所提供,含碘 95 %。将其配制为含碘伏5000μg/ml 、100μg/ml的母液。放置4℃备用。
1.1.4二溴海因母液的配制:二溴海因由西安汉宝公司生产,白色粉剂,将其配制为含二溴海因5000μg/ml、100μg/ml的母液。放置4℃备用.测定其有效氯含量为36.9%。
1.2实验方法
1.1.1最小抑菌浓度(MIC)的确定:分别以无菌操作法将黛龙素、碘伏、二溴海因加入肉汤培养基中,配制以下浓度梯度的药液:10、 5、2.5、1.25、0.625、 0.3125、0.156、0.078、0.039、0.020、0.01、0.005μg/ml。每管体积为10ml,均接入菌液0.1ml。分别设立菌液对照与药液对照。在含10 ml不加药液的另一试管肉汤培养基中加入细菌悬液0.1ml,作为菌液对照组。再取另一管10 ml液体培养基,加待测消毒剂0.1ml,不加菌液,作为消毒剂对照组。置28℃培养箱培养24h后观察。结果判定标准为:以溶液澄明无菌生长者为阴性,其中溶液稀释度最大的这管待测消毒剂浓度为最小抑菌浓度。
1.2.2  E3最小抑菌浓度(MIC)的确定:为了准确地测定E3的最小抑菌浓度。我们又分别配制了以下浓度梯度的药液:500、125、62.5、31.2、15.6、7.8、 3.9、 1.95、 0.98、 0.49、 0.245、 0.123μg/ml。按照1.2.1的方法测定这三种消毒剂对E3的MIC。

 

2.结果
2.1最小抑菌浓度:结果表明黛龙素对这四种致病菌均有较好的抑菌作用。黛龙素对AH-2、E3、RZ-01和751的MIC分别为2.5μg/ml,31.2/ml和1.25μg/ml,0.039μg/ml。碘伏对这四种病原菌的MIC均大于10μg/ml,二溴海因对AH-2、E3、RZ-01和751的MIC分别为10μg/ml,62.5μg/ml,>10μg/ml,10μg/ml(表1、2)。
表1:黛龙素、碘伏、二溴海因对AH-2、E3、RZ-01和751的最小抑菌浓度(MIC)

菌株

消毒剂

药物浓度(μg/ml)

 

MIC

10

5

2.5

1.25

0.625

0.312

0.156

0.078

0.039

0.020

0.010

0.005

μg/ml

AH-2

黛龙素

-*

-

-

+

+

+

+

+

+

+

+

+

2.5

E3

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

>10

RZ-01

-

-

-

-

+

+

+

+

+

+

+

+

1.25

751

-

-

-

-

-

-

-

-

-

+

+

+

0.039

AH-2

碘伏

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

>10

E3

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

>10

RZ-01

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

>10

751

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

>10

AH-2

二溴
海因

-

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

10

E3

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

>10

RZ-01

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

>10

751

-

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

10

*  “-”菌株不生长,“+”菌株生长。以下同。

表2:黛龙素、碘伏、二溴海因对E3的最小抑菌浓度(MIC)的补充试验

 


菌株

消毒剂

药物浓度(μg/ml)

MIC

500

125

62.5

31.2

15.6

7.8

3.9

1.95

0.98.

0.49

0.245

0.123

μg/ml

E3

 

黛龙素

-

-

-

-

+

+

+

+

+

+

+

+

31.2

 

碘伏

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

+

>500

二溴
海因

-

-

-

+

+

+

+

+

+

+

+

+

62.5


3.讨论
结果表明,黛龙素对迟钝爱德华氏菌(751)、嗜水气单胞菌(AH-2)、溶藻弧菌(RZ-01)均有很强的抑菌作用,其抑菌作用要比二溴海因和碘伏强,尤其是迟钝爱德华氏菌,黛龙素对它的MIC仅为0.039μg/ml,而其他两种消毒剂对这种致病菌的MIC分别为>10μg/ml和5μg/ml。与其他两种消毒剂相比,黛龙素对这四种菌的抑菌效果是显著的。所以在实际生产应用中,黛龙素有可能作为消毒剂使用。除了它的使用浓度较低外,它也不容易对养殖动物本身造成毒害或引起药物残留...